汉防己生物碱的提取
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1 汉防己总生物碱的提取
专利《一种汉防已甲素和汉防已乙素的提取方法》
专利号CN102382119B，本文作者不保证相关文本的准确性。
Abstract
一种汉防已甲素和汉防已乙素的提取方法，本发明是将汉防已粉末与生石灰粉混匀，采用醇提得到总生物碱浸膏，调pH至2～4后萃取，静置分层；其中的萃取液经碱化还原，得到的萃取物用丙酮溶解，经过滤、浓缩析晶，得到汉防已甲素粗品再重结晶，得到汉防已甲素产品；将静置后的酸性水溶液调pH9～11，萃取后将得到的萃取物用丙酮溶解，经过滤、浓缩析晶，得到汉防已乙素粗品再重结晶，得到汉防已乙素产品。与现有技术相比，本发明利用汉防已甲素和汉防已乙素的游离态，及其与酸反应生成盐的溶解度不同，通过调节pH，分别获得汉防已甲素和汉防已乙素；其操作可控性好，成分损失小，萃取试剂可重复使用，提取中不使用苯，生产成本低，适合工业化生产；可同时获得汉防已甲素和汉防已乙素两种产品，有效地提高了原料利用率、降低生产成本。
Description
一种汉防已甲素和汉防已乙素的提取方法
技术领域
[0001] 本发明属于植物有效成分分离提取技术领域，具体涉及从汉防已中提取汉防已甲素和汉防已乙素的方法。
背景技术
[0002]
汉防已甲素(Tetrandrine，又称汉防已碱、粉防已碱)和汉防已乙素(DemethyΙ-tetrandrine,又称去甲粉防已碱、防已诺啉碱)是从防已科植物汉防已(又称粉防已、石蟾蜍、白木香，Stephania
tetrandra S.Moore)的根中分离得到的双苄基异喹啉
类生物碱，结构式如下。
[0003]
[0004]汉防已甲素(Tetrandrine)汉防已乙素(Demethyl-tetrandrine)
[0005]目前关于汉防已甲素的药理学研究较多，已有片剂和注射剂应用于临床，作为抗风湿药及抗癌增效药，用于风湿病、关节痛、神经痛等病症，其与小剂量放射联合应用于肺癌治疗，也适用于单纯矽1、I1、III期及各期煤矽肺；研究表明，汉防已乙素具有镇痛、抗炎、抗过敏、降压和一定的松弛横纹肌的作用。
[0006]目前提取汉防已甲素和汉防已乙素的工艺〔见杨云、冯卫生主编的《中药化学成分提取分离手册》P130~133
;中国专利(申请号200710056757.2)吸附树脂法分离汉防已总生物碱中的单体生物碱〕存在以下问题:①纯化过程使用苯做为纯化溶剂去除汉防已乙素，不仅使成品存有残留，而且对生产环境和操作人员构成潜在危害；②采用硅胶或树脂为主要分离载体，载体不宜回收再利用，且操作复杂、生产成本高，导致工艺不易放大而不能工业化生产不能同时获取汉防已甲素和汉防已乙素。
发明内容
[0007] 本发明的目的是提供一种从汉防已中提取汉防已甲素和汉防已乙素的方法，该方法工艺流程简便易行、操作性强、生产成本低、易于实现工业化生产，并且不使用毒害溶剂，产品无残留。
[0008]
本发明所提出汉防已甲素和汉防已乙素的提取方法，其特征在于，将粉碎的汉防已药材按重量的2%5%拌入生石灰粉混匀，采用醇提方法进行热回流提取(醇溶液的体积浓度可选择70%85%
)，得到含有汉防已甲素和汉防已乙素的总生物碱浸膏；用酸化试剂调节浸膏pH至24后，再用萃取溶剂反复萃取，静置后分层为有机溶剂萃取液和酸性水溶液二层；将其中萃取液用碱化试剂还原后真空浓缩，回收萃取溶剂，将得到的萃取物用丙酮溶解，经过滤、浓缩后析晶，得到汉防已甲素粗品，再用乙醇重结晶，即得到汉防已甲素产品；将前述萃取静置后的酸性水溶液调PH至911，再用萃取溶剂反复萃取，回收萃取溶剂后，将得到的萃取物用丙酮溶解，经过滤、浓缩后析晶，得到汉防已乙素粗品，再用乙醇重结晶，即得到汉防已乙素产品；所述的萃取溶剂可以是乙酸乙酯、三氯甲烷、二氯甲烷的任一种或两种的组合。
[0009] 本发明的提取方法具体包括以下步骤:
[0010]
步骤一、提取浸膏:将汉防已药材粉碎成1060目的粗粉，按药材重量的25%拌入生石灰粉，混匀后置入提取罐，用体积浓度为70851.2的总生物碱浸膏；所述的醇溶液为乙醇溶液或是甲醇溶液，本步骤醇溶液总用量为药材重量的10倍，三次用量之比可以选择4:3:3;
%的醇溶液反复提取三次，合并提取液减压浓缩，得到比重为1.1
[0011] 步骤二、第一次萃取:将步骤一得到的浸膏用酸化试剂溶解成pH 23的酸性水溶液，用萃取溶剂反复萃取后静置分层，分出含汉防已甲素的有机溶剂萃取液和含汉防已乙素的酸性水溶液；所述的酸化试剂是质量浓度为2%5%的硫酸、或盐酸、或磷酸的水溶液；
[0012] 步骤三、在步骤二所得到的有机溶剂萃取液中加入碱液进行还原反应，回收萃取溶剂后得到含汉防已甲素的萃取物，将萃取物用丙酮溶解，经过滤、浓缩、析晶、再过滤后得到汉防已甲素粗品；将该粗品用乙醇重结晶，经过滤、烘干后即为纯度≥98%的汉防已甲
素产品；
[0013]
步骤四、第二次萃取:将步骤二所得到的含汉防已乙素的酸性水溶液，调pH至9.0~11.0，再用萃取溶剂反复萃取，回收萃取溶剂后，所得萃取物用丙酮溶解，经过滤、浓缩、析晶、再过滤后得到汉防已乙素粗品；将该粗品再用乙醇重结晶，经过滤、烘干后即为纯度≥98%的汉防已乙素产品。
[0014] 其中，碱化还原和调pH所用碱液可以是氢氧化钠、氢氧化钾、氨水、或碳酸钠的任一种水溶液。
[0015]
与现有技术相比具有以下优点:本发明充分利用汉防已甲素和汉防已乙素的游离态，及其与不同无机酸反应生成的盐在水溶液和有机溶剂中的溶解度不同，通过调节相应步骤中物料的pH，使目标成分经过两次液-液萃取后，分别获得汉防已甲素和汉防已乙素；其操作可控性好，且目标成分损失小，所用萃取试剂回收后可重复使用，降低了生产成本，适合工业化生产；本发明在提取中不使用苯，降低了生产过程对环境和操作人员的潜在危害，有效避免了苯的溶剂残留；本发明方法可同时获得汉防已甲素和汉防已乙素两种产品，有效地提高了原料利用率、降低生产成本。
具体实施方式
[0016] 以下结合实例对本发明技术方案作进一步详述。实例中所用试剂除TLC检测试剂为分析纯外，其他均为工业纯；汉防已药材购买自广西南宁药材市场；TLC检测方法参见国家药典委员会编制的《中国药典》(2010年版一部，P139)。
[0017]实例 1、
[0018]
步骤一、提取浸膏:将汉防已药材粉碎成20目的粗粉，取100kg，加入2kg的生石灰粉混合均匀后，置入不锈钢多功能提取罐中，加入400kg体积浓度为70%的甲醇溶液，加热保持沸腾2小时，滤出溶液；再分别用300kg的70%甲醇溶液按上述方法提取两次，合并三次所得提取液，减压浓缩回收甲醇，得到比重为1.12的总生物碱浸膏；
[0019]
步骤二、第一次萃取:将所得浸膏用5%浓度的盐酸水溶液在35°C溶解，使之成为PH为2的酸性水溶液，用乙酸乙酯与三氯甲烷(体积比1:
5)的混合溶剂作为萃取溶剂，萃取酸性水溶液中的汉防已甲素，同时用TLC法检测，直至酸性水溶液中无明显汉防已甲素反应斑点为止；静置萃取液分层，分出含汉防已甲素的有机溶剂萃取液和含汉防已乙素的酸性水溶液；
[0020]步骤三、将步骤二所得的有机溶剂萃取液加入饱和碳酸钠水溶液进行碱化还原反应(反应维持pH
8)，回收萃取溶剂后得到萃取物再用丙酮溶解，经过滤、浓缩至有结晶析出，静置析晶后，过滤得到汉防已甲素粗品；将该粗品用乙醇重结晶，得到白色汉防已甲素结晶，经过滤、烘干得纯度为98.5%的汉防已甲素产品0.62kg，收率为0.62%
；
[0021]
步骤四、二次萃取:将步骤二得到的含汉防已乙素的酸性水溶液，用饱和碳酸钠水溶液调PH至9.5，再用上述的萃取溶剂反复萃取，同时用TLC法检测，直至水溶液中无明显汉防已乙素反应斑点为止；回收萃取溶剂后，得到的萃取物用丙酮溶解，经过滤、浓缩、析晶、再过滤后得到汉防已乙素粗品；将粗品再用乙醇重结晶两次，得到白色汉防已乙素结晶，经过滤、烘干后得到纯度为98.1%的汉防已乙素产品0.23kg，收率为0.23%。
[0022]实例 2、
[0023]
步骤一、提取浸膏:将汉防已药材200kg粉碎成40目的粗粉，加入5kg的生石灰粉混合均匀后，置入不锈钢多功能提取罐中，加入800kg体积浓度为80%的乙醇溶液，加热保持沸腾2小时，滤出溶液；再分别用600kg的80%乙醇溶液按上述方法提取两次，合并三次所得提取液，减压浓缩回收乙醇，得到比重为1.15的总生物碱浸膏；
[0024]
步骤二、第一次萃取:将步骤一所得浸膏用2%浓度的硫酸水溶液在35°C溶解，使之成为pH为2.5的酸性水溶液，用三氯甲烷作为萃取溶剂，萃取所述酸性水溶液中的汉防已甲素，同时用TLC法检测，直至酸性水溶液中无明显汉防已甲素反应斑点为止；静置萃取液分层，分出含汉防已甲素的有机溶剂萃取液和含汉防已乙素的酸性水溶液；
[0025]
步骤三、将步骤二所得有机溶剂萃取液加入浓度为5%的NaOH水溶液进行碱化还原(反应维持pH ^
8.5),回收萃取溶剂后得到萃取物再用丙酮溶解，经过滤、浓缩至有结晶析出，静置析晶后，过滤得到汉防已甲素粗品；将该粗品用乙醇重结晶，得到白色汉防已甲素结晶，经过滤、烘干得到纯度为98.8%的汉防已甲素产品1.50kg，收率为0.75%
；
[0026]
步骤四、二次萃取:将步骤二得到的含汉防已乙素的酸性水溶液，用上述NaOH水溶液调pH至9.5，再用三氯甲烷萃取溶剂反复萃取，同时用TLC法检测，直至水溶液中无明显汉防已乙素反应斑点为止；回收萃取溶剂后，得到的萃取物用丙酮溶解，经过滤、浓缩、析晶、再过滤后得到汉防已乙素粗品；将该粗品再用乙醇重结晶两次，得到白色汉防已乙素结晶，经过滤、烘干后即为纯度为98.2%的汉防已乙素产品0.50kg,收率为0.25%。
[0027]实例 3、
[0028]
步骤一、提取浸膏:在50目汉防已药材粗粉500kg，加入15kg的生石灰粉混合均匀后，置入不锈钢多功能提取罐中，加入2000kg体积浓度为85%的乙醇溶液，加热保持沸腾2小时，滤出溶液；再分别用1500kg的85%乙醇溶液按上述方法提取两次，合并三次所得提取液，减压浓缩回收乙醇，得到比重为1.15的总生物碱浸膏；
[0029]
步骤二、第一次萃取:将步骤一所得浸膏用2%浓度的磷酸水溶液在60°C溶解，使之成为pH为2.5的酸性水溶液，用三氯甲烷作为萃取溶剂，萃取酸性水溶液中的汉防已甲素，同时用TLC法检测，直至酸性水溶液中无明显汉防已甲素反应斑点为止；静置萃取液分层，分出含汉防已甲素的有机溶剂萃取液和含汉防已乙素的酸性水溶液；
[0030]
步骤三、将步骤二所得有机溶剂萃取液用浓度为5%的氨水进行碱化还原反应(反应维持pH >
8)，回收萃取溶剂得到的萃取物用丙酮溶解，经过滤、浓缩至有结晶析出，静置析晶后，过滤得到汉防已甲素粗品；将该粗品用乙醇重结晶，得到白色汉防已甲素结晶，经过滤、烘干即为汉
防已甲素产品4.25kg，收率为0.85%。
[0031]
步骤四、二次萃取:将步骤二得到的含汉防已乙素的酸性水溶液，用NaCO3水溶液调pH至9.0，再用三氯甲烷萃取溶剂反复萃取，同时用TLC法检测，直至水溶液中无明显汉防已乙素反应斑点为止；回收萃取溶剂后，得到的萃取物用丙酮溶解，经过滤、浓缩、析晶、再过滤后得到汉防已乙素粗品；将粗品再用乙醇重结晶两次，得到白色汉防已乙素结晶，经过滤、烘干后得到纯度为98.3%的汉防已乙素产品1.45kg，收率为0.29%。
Claims
1.一种汉防已甲素和汉防已乙素的提取方法，其特征在于，将粉碎的汉防已药材按重量的2%5%拌入生石灰粉混匀，采用醇提方法进行热回流提取，得到含有汉防已甲素和汉防已乙素的总生物碱浸膏；用酸化试剂调节浸膏PH至24后，再用萃取溶剂反复萃取，静置后分层为有机溶剂萃取液和酸性水溶液二层；将其中萃取液用碱化试剂还原后真空浓缩，回收萃取溶剂，将得到的萃取物用丙酮溶解，经过滤、浓缩后析晶，得到汉防已甲素粗品，再用乙醇重结晶，即得到汉防已甲素产品；将前述萃取静置后的酸性水溶液调pH至9~.11，再用萃取溶剂反复萃取，回收萃取溶剂后，将得到的萃取物用丙酮溶解，经过滤、浓缩后析晶，得到汉防已乙素粗品，再用乙醇重结晶，即得到汉防已乙素产品；所述的萃取溶剂为乙酸乙酯、三氯甲烷、二氯甲烷的任一种或两种的组合。
2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，包括以下步骤:
步骤一、提取浸膏:将汉防已药材粉碎成1060目的粗粉，按药材重量的25%拌入生石灰粉，混匀后置入提取罐，用体积浓度为7085%的醇溶液反复提取三次，合并提取液减压浓缩，得到比重为1.11.2的总生物碱浸膏；所述的醇溶液为乙醇溶液或是甲醇溶液，本步骤醇溶液总用量为药材重量的10倍；
步骤二、第一次萃取:将步骤一得到的浸膏用酸化试剂溶解成pH
23的酸性水溶液，用萃取溶剂反复萃取后静置分层，分出含汉防已甲素的有机溶剂萃取液和含汉防已乙素的酸性水溶液；所述的酸化试剂是质量浓度为2%5%的硫酸、或盐酸、或磷酸的水溶液；
步骤三、在步骤二所得到的有机溶剂萃取液中加入碱液进行还原反应，回收萃取溶剂后得到含汉防已甲素的萃取物，将萃取物用丙酮溶解，经过滤、浓缩、析晶、再过滤后得到汉防已甲素粗品；将该粗品用乙醇重结晶，经过滤、烘干后即为纯度≥98%的汉防已甲素产品;
步骤四、第二次萃取:将步骤二所得到的含汉防已乙素的酸性水溶液，调pH至9.0~.11.0，再用萃取溶剂反复萃取，回收萃取溶剂后，所得萃取物用丙酮溶解，经过滤、浓缩、析晶、再过滤后得到汉防已乙素粗品；将该粗品用乙醇重结晶，经过滤、烘干后即为纯度≥98%的汉防已乙素产品。
